科普讲堂 | 细胞染色的快、准、狠

作为细胞染色试剂染色币，那如何追求快、准、狠的细胞染色试剂呢，让我们一起来看吧！

AOPI染色

AO/PI 双染细胞凋亡检测是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态染色币。吖啶橙(Acridine Orange，AO)为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。

在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片段，形成凋亡小体染色币。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。

Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞染色币。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。

已做过上万次检测，效果稳定，结果稳定，使用此方法计数，省时省力省人工，结果又是快、准、狠哦！当然不同样本需求不同，下面染色试剂也可以使用哦染色币。

Hoechst 染色

Hoechst是一种膜通透性的荧光染料，故正常细胞和中早期调亡细胞均可被Hoechst着色，但是正常细胞核Hoechst染色的形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；而调亡细胞的细胞核由于浓集而呈亮蓝色，或核呈分叶，碎片状，边集染色币。

常用Hoechst33258和Hoechst33342，前者渗透性不如后者好，多用于活细胞染色，而后者活细胞和死细胞均可染色币。Hoechst33342能透过胞膜完整的细胞嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的蓝色荧光。凋亡的细胞核染色增强荧光更为明亮、呈圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者形态迥然相异，很易判别。

钙黄绿素-AM(Calcein-AM)

Calcein-AM 是一种荧光、细胞渗透性荧光探针，水解后发出荧光染色币。当乙酰氧基甲酯完好无损时，Calcein-AM 探针在活细胞中存在的非特异性酯酶的作用之前是无荧光的。裂解 AM酯可使探针分别在 488nm/520nm 处激发和发射。Calcein-AM 的信号与细胞活力成正比，因为活力差的细胞中酯酶活性降低。这种细胞渗透探针不会通过固定和透化保留。

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Annexin-V 染色

Annexin V是一种检测细胞凋亡的试剂，在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧，细胞发生凋亡早期，膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧染色币。Annexin V作为一种磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，它通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V是检测细胞早期凋亡的灵敏指标。

HE染色

苏木精 — 伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)，简称HE染色法 ，石蜡切片技术里常用的染色法之一 染色币。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。

JC-1 染色

JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体存在，发射光以绿光为主，而在高浓度时则可以形成多聚体，发射光以红光为主染色币。线粒体本身存在一定的极性，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由钙离子、钠离子和氢离子流调控。当线粒体状态良好时对JC-1摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形成存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化时，线粒体内JC-1的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。

台盼蓝染色

台盼蓝(Trypan Blue)或称台盼兰、锥虫蓝，是细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性与细胞的存活率，是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一染色币。正常的活细胞细胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，细胞不会被染成蓝色；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞可被台盼蓝染成蓝色。通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死亡。台盼蓝可被巨噬细胞吞噬，故可用于巨噬细胞的活体染色剂。凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。台盼蓝染色后，通过显微镜下直接计数或显微镜下拍照后计数，就可以对细胞存活率进行比较精确的定量。

DAPI染色

DAPI 即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式为C16 H15 N5 ·2C3 H6 O3 ，分子量457.48染色币。DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用,可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) 。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。DAPI染色不能区分活死细胞，因为DAPI可以透过完整的细胞膜，它可以用于活细胞和固定细胞的染色。活细胞死细胞都能够被DAPI染色，所以光看到蓝色荧光，无法区分。

王俊杰 | 文案

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